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星空app:伊斯平斯的作用 - 生物活性 - 靶点活性

发布时间:2018-12-04 19:12:12 编辑作者:活性达人

伊斯平斯图片

图片:伊斯平斯结构式

伊斯平斯,英文名Ispinesib,CAS号是336113-53-2。它是一种选择性,有效和可逆的驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂,来自喹唑啉星空app,具有抗肿瘤特性。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍伊斯平斯的生物活性:

1)体外活性
伊斯平斯是一种有效的,高度特异性的KSP抑制剂,Ki app为1.7 nM [1]。伊斯平斯(150 nM)抑制BT-474和MDA-MB-468细胞系,GI50分别为45和19 nM [2]。伊斯平斯(SB715992,15和30 nM)抑制PC-3前列腺癌细胞增殖48.65%和52.16%,并分别诱导前列腺癌细胞凋亡1094.88%和1516.70%。伊斯平斯 up调节负责细胞凋亡和细胞周期停滞的基因,并下调负责细胞增殖和存活的基因。金雀异黄素可以增强伊斯平斯的抗增殖和促凋亡活性[3]。

在PC-3前列腺癌细胞中, 伊斯平斯(5 nM 和 30 nM)通过调节信号的基因表达水平,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。在乳腺癌细胞系中, 伊斯平斯(7.4 nM–600 nM)具有广谱抑制活性。在肿瘤细胞系中(Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109,和MX-1),伊斯平斯(IC50=1.2-9.5 nM) 具有很强细胞毒性。

2)体内活性
伊斯平斯(SCID,8 mg / kg;裸剂,10 mg / kg,q4d×3)可降低携带ER阳性(MCF7),HER2阳性(KPL4,HCC1954和BT-474)肿瘤异种移植物的小鼠的肿瘤体积, 通过ip进行三重阴性(MDA-MB-468)乳腺癌细胞 每4天一次剂量重复三次[2]。

携带移植瘤的小鼠模型, 伊斯平斯(4.5-15 mg/kg)能够抑制Colo205, Colo201, HT-29细胞生长。在小鼠实体瘤中,用伊斯平斯处理(6 -10 mg/kg ),Madison 109肺癌, M5076肉瘤,及L1210和P388白血病能够被抑制。携带乳腺癌细胞MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468,和KPL4移植瘤的小鼠中,伊斯平斯(8-10 mg/kg )抑制肿瘤生长。

我们已经了解了伊斯平斯的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)细胞实验
将PC-3前列腺癌细胞以4×103细胞/孔的密度接种在96孔板中。将PC-3细胞温育24小时,以使其附着于组织培养板的每个孔的表面。然后,用不同浓度的试剂处理细胞并孵育1至3天。首先,分别用15和30nM的伊斯平斯处理PC-3细胞。其次,用7.5或10nM的伊斯平斯加30μM的染料木黄星空app对PC-3细胞进行组合处理。最后,用30μM染料木黄星空app预处理PC-3细胞24小时,然后用15nM的伊斯平斯处理。用0.3mM Na 2 CO 3(载体对照)处理对照细胞。处理后,将PC3细胞在37℃下与MTT(0.5mg / mL)一起温育2小时,并在室温下将异丙醇温育1小时。然后通过使用ULTRA多功能微板读数器在595nm处测定每个样品的分光光度吸光度[3]。

2)动物实验
肿瘤体积为~250mm 3的小鼠接受单剂量的伊斯平斯(10mg / kg)。解剖肿瘤,固定在10%缓冲的福尔马林中,并包埋在石蜡中,制备5-μm组织切片。通过在50mM柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)中煮沸来进行抗原修复,然后将切片在3%过氧化氢中温育,在PBS-0.1%Tween中洗涤,并在10%山羊血清中封闭。使用Alexa Fluor 488二抗检测磷酸 - 组蛋白H3(PH3)抗体。用显微镜以×10放大率拍摄图像,并使用MetaMorph软件捕获图像,通过计算每个总细胞的PH3阳性细胞的面积比来量化PH3表达。完成Ki67 /切割的胱天蛋白酶-3染色。非荧光图像在Olympus BX41显微镜上以×20放大倍数拍摄[2]。

3)激酶实验
使用丙星空app酸激酶 - 乳酸脱氢酶检测系统进行驱动蛋白特异性分析,该系统将ADP的产生与NADH的氧化偶联。在340nm处监测吸光度变化。使用纳摩尔浓度的KSP的稳态研究使用基于灵敏荧光的测定进行,所述测定利用丙星空app酸激酶,丙星空app酸氧化酶和辣根过氧化物酶偶联检测系统,其将ADP的产生与Amplex Red的氧化偶联至荧光试卤。通过荧光监测试卤灵的产生(λ激发= 520nm和λemission= 580nm)。在补充有10μM紫杉醇的PEM25缓冲液[25mM Pipes-K +(pH 6.8),2mM MgCl 2,1mM EGTA]中进行稳态生化实验,用于涉及微管的实验。在PEM25缓冲液中以500μMATP,5μMMT和1nM KSP测定稳态抑制的IC 50。从浓度 - 响应曲线中提取伊斯平斯的Ki app(表观抑制剂解离常数)估计值,并对酶浓度进行明确校正[1]。

今天介绍了伊斯平斯的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,伊斯平斯Ispinesib是一种特异性的 KSP 抑制剂,Ki app 值为 1.7 nM。它的靶点活性是KSP (HsEg5),1.7nM(Kiapp)。

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参考文献:
[1]. Lad L, et al. Mechanism of inhibition of human KSP by ispinesib. Biochemistry. 2008 Mar 18;47(11):3576-85.
[2]. Purcell JW, et al. Activity of the kinesin spindle protein inhibitor ispinesib (SB-715992) in models of breast cancer. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):566-76.
[3]. Davis DA, et al. Increased therapeutic potential of an experimental anti-mitotic inhibitor SB715992 by genistein in PC-3 human prostate cancer cell line. BMC Cancer. 2006 Jan 24;6:22.

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