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星空app:鲁索利替尼的生物活性

发布时间:2018-10-14 22:03:32 编辑作者:活性小子

鲁索利替尼图片

图片:鲁索利替尼结构式

鲁索利替尼是一种口服生物可利用的Janus相关激酶(JAK)抑制剂,具有潜在的抗肿瘤和免疫调节活性。它的靶点活性为JAK1,3.3nM;JAK2,2.8nM。

一、鲁索利替尼的生物活性详解:
1)体外活性
鲁索利替尼有效且选择性地抑制JAK2V617F介导的信号传导和增殖,以剂量依赖性方式显着增加细胞凋亡,并且在64nM时导致Ba / F3细胞中具有去极化线粒体的细胞加倍。 鲁索利替尼对红细胞集落形成具有显着的效力,IC50为67 nM,并且抑制来自正常供体和真性红细胞增多症患者的红系祖细胞增殖,IC50值分别为407 nM和223 nM [1]。

2)体内活性
鲁索利替尼(180 mg / kg,口服,每日两次)导致第22天存活率大于90%,显着降低脾肿大和炎性细胞因子的循环水平,优先消除肿瘤细胞,导致生存期显着延长,无骨髓抑制或JAK2V617F驱动的小鼠模型中的免疫抑制作用[1]。在鲁索利替尼组中,41.9%的患者达到主要终点,而在骨髓纤维化双盲试验中安慰剂组为0.7%。 鲁索利替尼导致维持脾脏体积减少,总症状评分改善50%或更多[2]。 鲁索利替尼(15 mg每日两次)治疗导致总共28%的患者在第48周时骨髓纤维化患者的脾脏体积减少至少35%,而接受最佳治疗组的患者为0%。使用鲁索利替尼时,平均可触及的脾脏长度减少了56%,但在第48周时使用最佳治疗方法增加了4%。在鲁索利替尼组患者的总体生活质量指标改善,并且症状减轻骨髓纤维化[3]。

二、鲁索利替尼的生物活性实验方法:
1)细胞实验
将细胞以2×103 /孔的白底96孔板接种,用来自DMSO原液的鲁索利替尼(INCB018424)处理(0.2%最终DMSO浓度),并在37℃下用5%CO 2温育48小时。 通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量活力。 将值转化为相对于载体对照的抑制百分比,并使用PRISM GraphPad根据数据的非线性回归分析拟合IC 50曲线。

2)动物实验
给小鼠喂食标准啮齿动物食物并随意提供水。 将Ba / F3-JAK2V617F细胞(每只小鼠105只)静脉内接种到6至8周龄雌性BALB / c小鼠中。 每天监测生存情况,并且死亡的垂死小鼠被人道杀死并且被认为已经死亡。 用载体(5%二甲基乙酰胺,0.5%甲基纤维素)或鲁索利替尼(INCB018424)处理在细胞接种后24小时内开始,每天两次通过口服强饲法。 使用分析的Bayer Advia120测量血液学参数,并使用Dunnett测试确定统计学显着性。

3)激酶实验
使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达重组蛋白,并用亲和层析纯化。 JAK激酶测定使用与肽底物(-EQEDEPEGDYFEWLE)的均相时间分辨荧光测定。 每种酶反应用鲁索利替尼或对照,JAK酶,500nM肽,三磷酸腺苷(ATP; 1mM)和2%二甲基亚砜(DMSO)进行1小时。 50%抑制浓度(IC 50)计算为抑制50%荧光信号所需的INCB018424浓度。

参考文献:
[1]. Quintas-Cardama A, et al. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
[2]. Verstovsek S, et al. A double-blind, placebo-controlled trial of ruxolitinib for myelofibrosis. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.
[3]. Harrison C, et al. JAK inhibition with ruxolitinib versus best available therapy for myelofibrosis. N Engl J Med. 2012 Mar 1;366(9):787-98.

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